उत्पादने
२०१९-एनसीओव्हीसाठी लाईफकॉसम सार्स-कोव्ह-२-आरटी-पीसीआर डिटेक्शन किट
अपेक्षित वापर
या किटचा वापर घशातील स्वॅब, नासोफॅरिंजियल स्वॅब, ब्रोन्कोअल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड, थुंकी वापरून नवीन कोरोनाव्हायरस (२०१९-एनसीओव्ही) च्या गुणात्मक तपासणीसाठी केला जातो. या उत्पादनाचा शोध निकाल केवळ क्लिनिकल संदर्भासाठी आहे आणि तो क्लिनिकल निदान आणि उपचारांसाठी एकमेव पुरावा म्हणून वापरला जाऊ नये. रुग्णाच्या क्लिनिकल प्रकटीकरण आणि इतर प्रयोगशाळेच्या चाचण्यांसह स्थितीचे व्यापक विश्लेषण करण्याची शिफारस केली जाते.
तपासणी तत्व
हे किट एक-चरण RT- PCR तंत्रज्ञानावर आधारित आहे. खरं तर, २०१९ च्या नवीन कोरोनाव्हायरस (२०१९-nCoV) ORF1ab आणि N जीन्स हे प्रवर्धन लक्ष्य क्षेत्र म्हणून निवडले गेले होते. विशिष्ट प्राइमर्स आणि फ्लोरोसेंट प्रोब (N जीन प्रोब्सना FAM ने लेबल केले आहे आणि ORF1ab प्रोब्सना HEX ने लेबल केले आहे) नमुन्यांमध्ये २०१९ च्या नवीन प्रकारच्या कोरोनाव्हायरस RNA शोधण्यासाठी डिझाइन केलेले आहेत. किटमध्ये नमुना संकलन, RNA आणि PCR प्रवर्धन प्रक्रियेचे निरीक्षण करण्यासाठी अंतर्जात अंतर्गत नियंत्रण शोध प्रणाली (CY5 ने लेबल केलेले अंतर्गत नियंत्रण जीन प्रोब) देखील समाविष्ट आहे, ज्यामुळे खोटे नकारात्मक परिणाम कमी होतात.
मुख्य घटक
| घटक | खंड(४८ टन/किट) |
| आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया उपाय | ९६ मायक्रॉन |
| nCOV प्राइमर TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | ८६४µलिटर |
| नकारात्मक नियंत्रण | १५०० मायक्रॉन |
| nCOV सकारात्मक नियंत्रण (l ORF1ab N Gene) | १५०० मायक्रॉन |
स्वतःचे अभिकर्मक: आरएनए निष्कर्षण किंवा शुद्धीकरण अभिकर्मक. नकारात्मक/सकारात्मक नियंत्रण: सकारात्मक नियंत्रण म्हणजे लक्ष्य तुकडा असलेले आरएनए, तर नकारात्मक नियंत्रण म्हणजे न्यूक्लिक आम्ल-मुक्त पाणी. वापरादरम्यान, त्यांनी निष्कर्षणात भाग घेतला पाहिजे आणि ते संसर्गजन्य मानले पाहिजेत. संबंधित नियमांनुसार त्यांची हाताळणी आणि विल्हेवाट लावली पाहिजे.
अंतर्गत संदर्भ जनुक म्हणजे मानवी RnaseP जनुक.
स्टोरेज परिस्थिती आणि कालबाह्यता तारीख
-२०±५℃, ५ पेक्षा जास्त वेळा वारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळा, ६ महिन्यांसाठी वैध.
लागू असलेले साधन
FAM / HEX / CY5 आणि इतर मल्टी-चॅनेल फ्लोरोसेंट PCR उपकरणांसह.
नमुना आवश्यकता
१. लागू नमुना प्रकार: घशातील स्वॅब, नासोफरींजियल स्वॅब, ब्रोन्कोअल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड, थुंकी.
२. नमुना संकलन (अ‍ॅसेप्टिक तंत्र)
फॅरेन्जियल स्वॅब: टॉन्सिल्स आणि पोस्टरियर फॅरेन्जियल वॉल एकाच वेळी दोन स्वॅबने पुसून टाका, नंतर स्वॅब हेड सॅम्पलिंग सोल्यूशन असलेल्या टेस्ट ट्यूबमध्ये बुडवा.
थुंकी: रुग्णाला खोल खोकला आल्यानंतर, खोकलेला थुंकी सॅम्पलिंग सोल्यूशन असलेल्या स्क्रू कॅप टेस्ट ट्यूबमध्ये गोळा करा; ब्रोन्कोअल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड: वैद्यकीय व्यावसायिकांकडून सॅम्पलिंग. ३. नमुन्यांचे साठवण आणि वाहतूक.
विषाणू वेगळे करण्यासाठी आणि आरएनए चाचणीसाठीचे नमुने शक्य तितक्या लवकर तपासले पाहिजेत. २४ तासांच्या आत शोधता येणारे नमुने ४°C वर साठवले जाऊ शकतात; जे २४ तासांच्या आत शोधता येत नाहीत ते
तास -७०℃ किंवा त्यापेक्षा कमी तापमानात साठवले पाहिजेत (जर -७०℃ ची साठवणूक स्थिती नसेल, तर ते असावेत
तात्पुरते -२०°C रेफ्रिजरेटरमध्ये साठवले पाहिजे). वाहतुकीदरम्यान नमुने वारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळावेत. संकलनानंतर शक्य तितक्या लवकर नमुने प्रयोगशाळेत पाठवावेत. जर नमुने लांब अंतरावर नेण्याची आवश्यकता असेल तर कोरड्या बर्फाच्या साठवणुकीची शिफारस केली जाते.
चाचणी पद्धती
१ नमुना प्रक्रिया आणि आरएनए निष्कर्षण (नमुना प्रक्रिया क्षेत्र)
आरएनए काढण्यासाठी २००μl द्रव नमुना घेण्याची शिफारस केली जाते. संबंधित काढणीच्या चरणांसाठी, व्यावसायिक आरएनए काढणी किटच्या सूचना पहा. नकारात्मक आणि नकारात्मक दोन्ही
या किटमधील नियंत्रणे काढण्यात गुंतलेली होती.
२ पीसीआर अभिकर्मक तयारी (अभिकर्मक तयारी क्षेत्र)
२.१ किटमधून सर्व घटक काढून टाका आणि वितळवा आणि खोलीच्या तपमानावर मिसळा. वापरण्यापूर्वी काही सेकंदांसाठी ८,००० आरपीएमवर सेंट्रीफ्यूज करा; आवश्यक प्रमाणात अभिकर्मकांची गणना करा आणि खालील तक्त्यामध्ये दाखवल्याप्रमाणे प्रतिक्रिया प्रणाली तयार केली जाते:
| घटक | नत्र सर्व्हिंग (२५µl प्रणाली) |
| nCOV प्राइमर TaqMan प्रोबेमिक्चर | १८ μl × नॅथन |
| आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया उपाय | २ μl × नॅथन |
| *N = चाचणी केलेल्या नमुन्यांची संख्या + १ (निगेटिव्ह कंट्रोल) + १ (nCOV)सकारात्मक नियंत्रण) | |
२.२ घटक पूर्णपणे मिसळल्यानंतर, नळीच्या भिंतीवरील सर्व द्रव नळीच्या तळाशी पडण्यासाठी थोड्या काळासाठी सेंट्रीफ्यूज करा आणि नंतर २० µl प्रवर्धन प्रणाली PCR नळीमध्ये टाका.
३ नमुना (नमुना तयार करण्याचे क्षेत्र)
काढल्यानंतर ५μl निगेटिव्ह आणि पॉझिटिव्ह कंट्रोल्स जोडा. चाचणी करायच्या नमुन्याचा आरएनए पीसीआर रिअॅक्शन ट्यूबमध्ये जोडला जातो.
ट्यूबला घट्ट बंद करा आणि अॅम्प्लिफिकेशन डिटेक्शन एरियामध्ये स्थानांतरित करण्यापूर्वी काही सेकंदांसाठी 8,000 rpm वर सेंट्रीफ्यूज करा.
४ पीसीआर अॅम्प्लिफिकेशन (अ‍ॅम्प्लिफाइड डिटेक्शन एरिया)
४.१ अभिक्रिया नळी उपकरणाच्या नमुना पेशीमध्ये ठेवा आणि खालीलप्रमाणे पॅरामीटर्स सेट करा:
| टप्पा | सायकल क्रमांक | तापमान(°C) | वेळ | संग्रहसाइट |
| उलटट्रान्सक्रिप्शन | 1 | 42 | १० मिनिटे | - |
| पूर्व-विकृतीकरणn | 1 | 95 | १ मिनिट | - |
| सायकल | 45 | 95 | १५ चे दशक | - |
| 60 | ३० चे दशक | डेटा संकलन |
इन्स्ट्रुमेंट डिटेक्शन चॅनेल निवड: फ्लोरोसेन्स सिग्नलसाठी FAM、HEX、CY5 चॅनेल निवडा. संदर्भासाठी फ्लोरोसेंट नाही, कृपया ROX निवडू नका.
५ निकाल विश्लेषण (सेटिंगसाठी कृपया प्रत्येक उपकरणाच्या प्रायोगिक सूचना पहा)
प्रतिक्रियेनंतर, निकाल जतन करा. विश्लेषणानंतर, लॉगरिदमिक ग्राफमध्ये प्रतिमेनुसार बेसलाइनचे प्रारंभिक मूल्य, शेवटचे मूल्य आणि थ्रेशोल्ड मूल्य समायोजित करा (वापरकर्ता वास्तविक परिस्थितीनुसार समायोजित करू शकतो, प्रारंभिक मूल्य 3~15 वर सेट केले जाऊ शकते, शेवटचे मूल्य 5~20 वर सेट केले जाऊ शकते, समायोजन) विंडोच्या थ्रेशोल्डवर, थ्रेशोल्ड रेषा लॉगरिदमिक टप्प्यात असते आणि नकारात्मक नियंत्रणाचा प्रवर्धन वक्र सरळ रेषा किंवा थ्रेशोल्ड रेषेच्या खाली असतो).
६ क्वाटी कंट्रोल (चाचणीमध्ये प्रक्रियात्मक नियंत्रण समाविष्ट आहे) नकारात्मक कंट्रोल: FAM, HEX, CY5 डिटेक्शन चॅनेलसाठी कोणताही स्पष्ट अॅम्प्लिफिकेशन वक्र नाही.
COV पॉझिटिव्ह कंट्रोल: FAM आणि HEX डिटेक्शन चॅनेलचे स्पष्ट प्रवर्धन वक्र, Ct मूल्य≤32, परंतु CY5 चॅनेलचे कोणतेही प्रवर्धन वक्र नाही;
वरील आवश्यकता एकाच प्रयोगात एकाच वेळी पूर्ण केल्या पाहिजेत; अन्यथा, प्रयोग अवैध असेल आणि तो पुन्हा करावा लागेल.
७ निकालांचे निर्धारण.
७.१ जर चाचणी नमुन्याच्या FAM आणि HEX चॅनेलमध्ये कोणतेही प्रवर्धन वक्र किंवा Ct मूल्य> ४० नसेल आणि CY5 चॅनेलमध्ये प्रवर्धन वक्र असेल, तर असे ठरवता येते की नमुन्यात २०१९ चा नवीन कोरोनाव्हायरस (२०१९-nCoV) RNA नाही;
.2 जर चाचणी नमुन्यात FAM आणि HEX चॅनेलमध्ये स्पष्ट प्रवर्धन वक्र असतील आणि Ct मूल्य ≤40 असेल, तर असे ठरवता येते की नमुना २०१९ च्या नवीन कोरोनाव्हायरस (२०१९-nCoV) साठी सकारात्मक आहे.
७.३ जर चाचणी नमुन्यात फक्त FAM किंवा HEX च्या एकाच चॅनेलमध्ये स्पष्ट प्रवर्धन वक्र असेल आणि Ct मूल्य ≤40 असेल आणि दुसऱ्या चॅनेलमध्ये प्रवर्धन वक्र नसेल, तर निकालांची पुन्हा चाचणी करणे आवश्यक आहे. जर पुनर्चाचणीचे निकाल सुसंगत असतील, तर नवीनसाठी नमुना सकारात्मक असल्याचे ठरवता येईल.
कोरोनाव्हायरस २०१९ (२०१९-एनसीओव्ही). जर पुन्हा चाचणीचा निकाल नकारात्मक आला, तर असे ठरवता येईल की नमुना २०१९ च्या नवीन कोरोनाव्हायरस (२०१९-एनसीओव्ही) साठी नकारात्मक आहे.
सकारात्मक निर्णय मूल्य
किटचे संदर्भ CT मूल्य निश्चित करण्यासाठी ROC वक्र पद्धत वापरली जाते आणि अंतर्गत नियंत्रण संदर्भ मूल्य 40 आहे.
चाचणी निकालांचे स्पष्टीकरण
१. प्रत्येक प्रयोगाची नकारात्मक आणि सकारात्मक नियंत्रणांसाठी चाचणी केली पाहिजे. चाचणी निकाल फक्त तेव्हाच निश्चित केले जाऊ शकतात जेव्हा नियंत्रणे गुणवत्ता नियंत्रण आवश्यकता पूर्ण करतात.
२. जेव्हा FAM आणि HEX डिटेक्शन चॅनेल पॉझिटिव्ह असतात, तेव्हा सिस्टम स्पर्धेमुळे CY5 चॅनेल (अंतर्गत नियंत्रण चॅनेल) वरून निकाल नकारात्मक असू शकतो.
३. जेव्हा अंतर्गत नियंत्रण निकाल नकारात्मक असतो, जर चाचणी ट्यूबचे FAM आणि HEX शोध चॅनेल देखील नकारात्मक असतात, तर याचा अर्थ असा की सिस्टम अक्षम आहे किंवा ऑपरेशन चुकीचे आहे, चाचणी अवैध आहे. म्हणून, नमुन्यांची पुन्हा चाचणी करणे आवश्यक आहे.
