उत्पादने
2019-nCoV साठी Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR डिटेक्शन किट
अपेक्षित वापर
या किटचा वापर नवीन कोरोनाव्हायरस (2019-nCoV) च्या गुणात्मक तपासणीसाठी घशातील स्वॅब्स, नॅसोफॅरिंजियल स्वॅब्स, ब्रॉन्कोआल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड, थुंकीचा वापर करून केला जातो. या उत्पादनाचा शोध परिणाम केवळ क्लिनिकल संदर्भासाठी आहे आणि त्याचा वापर केला जाऊ नये. क्लिनिकल निदान आणि उपचारांसाठी पुरावे. रुग्णाच्या नैदानिक अभिव्यक्ती आणि इतर प्रयोगशाळा चाचण्यांच्या संयोजनात स्थितीचे सर्वसमावेशक विश्लेषण करण्याची शिफारस केली जाते.
तपासणी तत्त्व
किट वन-स्टेप आरटी-पीसीआर तंत्रज्ञानावर आधारित आहे.खरं तर, 2019 नवीन कोरोनाव्हायरस (2019-nCoV) ORF1ab आणि N जनुकांची प्रवर्धन लक्ष्य क्षेत्रे म्हणून निवड केली गेली.विशिष्ट प्राइमर्स आणि फ्लोरोसेंट प्रोब्स (N जनुक प्रोबला FAM आणि ORF1ab प्रोब हे HEX ने लेबल केलेले आहेत) नमुन्यांमध्ये 2019 नवीन-प्रकारचे कोरोनाव्हायरस RNA शोधण्यासाठी डिझाइन केले आहेत.नमुना संकलन, RNA आणि PCR प्रवर्धनाच्या प्रक्रियेवर लक्ष ठेवण्यासाठी किटमध्ये अंतर्जात अंतर्गत नियंत्रण शोध प्रणाली (CY5 लेबल केलेले अंतर्गत नियंत्रण जनुक तपासणी) देखील समाविष्ट आहे, ज्यामुळे चुकीचे नकारात्मक परिणाम कमी होतात.
मुख्य घटक
| घटक | खंड(48T/किट) |
| RT-PCR प्रतिक्रिया उपाय | 96µl |
| nCOV प्राइमर TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| नकारात्मक नियंत्रण | 1500µl |
| nCOV सकारात्मक नियंत्रण (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
स्वतःचे अभिकर्मक: आरएनए निष्कर्षण किंवा शुद्धीकरण अभिकर्मक.नकारात्मक/सकारात्मक नियंत्रण: सकारात्मक नियंत्रण हे लक्ष्य तुकडा असलेले आरएनए असते, तर नकारात्मक नियंत्रण न्यूक्लिक अॅसिड-मुक्त पाणी असते.वापरादरम्यान, त्यांनी निष्कर्षणात भाग घेतला पाहिजे आणि त्यांना संसर्गजन्य मानले पाहिजे.ते संबंधित नियमांनुसार हाताळले पाहिजेत आणि त्यांची विल्हेवाट लावली पाहिजे.
अंतर्गत संदर्भ जनुक मानवी RnaseP जनुक आहे.
स्टोरेज अटी आणि कालबाह्यता तारीख
-20±5℃, वारंवार गोठवणे आणि 5 पेक्षा जास्त वेळा वितळणे टाळा, 6 महिन्यांसाठी वैध.
लागू साधन
FAM/HEX/CY5 आणि इतर मल्टी-चॅनल फ्लोरोसेंट पीसीआर इन्स्ट्रुमेंटसह.
नमुना आवश्यकता
1.लागू नमुन्याचे प्रकार: घशातील स्वॅब्स, नासोफरींजियल स्वॅब्स, ब्रॉन्कोआल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड, थुंकी.
2. नमुना संकलन (असेप्टिक तंत्र)
फॅरेंजियल स्वॅब: टॉन्सिल आणि पोस्टरियरीअर फॅरेंजियल भिंत एकाच वेळी दोन स्वॅबने पुसून टाका, नंतर सॅम्पलिंग सोल्यूशन असलेल्या टेस्ट ट्यूबमध्ये स्वॅबचे डोके बुडवा.
थुंकी: रुग्णाला खोल खोकला झाल्यानंतर, खोकलेला थुंकी सॅम्पलिंग द्रावण असलेल्या स्क्रू कॅप टेस्ट ट्यूबमध्ये गोळा करा;ब्रॉन्कोआल्व्होलर लॅव्हेज फ्लुइड: वैद्यकीय व्यावसायिकांद्वारे नमुना घेणे.3.नमुन्यांची साठवण आणि वाहतूक
विषाणू अलगाव आणि आरएनए चाचणीसाठी नमुने शक्य तितक्या लवकर तपासले पाहिजेत.24 तासांच्या आत शोधले जाऊ शकणारे नमुने 4℃ वर साठवले जाऊ शकतात;जे 24 च्या आत शोधले जाऊ शकत नाहीत
तास -70℃ किंवा त्याहून खाली साठवले जावे (जर -70℃ ची स्टोरेज स्थिती नसेल, तर ते असावे
-20℃ रेफ्रिजरेटरमध्ये तात्पुरते साठवले जाते).वाहतुकीदरम्यान नमुने वारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळावे.संकलनानंतर नमुने शक्य तितक्या लवकर प्रयोगशाळेत पाठवावेत.नमुने लांब अंतरावर नेण्याची आवश्यकता असल्यास, कोरड्या बर्फाच्या साठवणुकीची शिफारस केली जाते.
चाचणी पद्धती
1 नमुना प्रक्रिया आणि आरएनए निष्कर्षण (नमुना प्रक्रिया क्षेत्र)
RNA काढण्यासाठी 200μl द्रव नमुना घेण्याची शिफारस केली जाते.संबंधित एक्सट्रॅक्शन चरणांसाठी, व्यावसायिक RNA एक्स्ट्रॅक्शन किट्सच्या सूचना पहा.नकारात्मक आणि नकारात्मक दोन्ही
या किटमधील नियंत्रणे काढण्यात गुंतलेली होती.
2 पीसीआर अभिकर्मक तयारी (अभिकर्मक तयारी क्षेत्र)
2.1 किटमधील सर्व घटक काढून टाका आणि खोलीच्या तपमानावर वितळवून मिसळा.वापरण्यापूर्वी काही सेकंदांसाठी 8,000 rpm वर सेंट्रीफ्यूज;आवश्यक प्रमाणात अभिकर्मकांची गणना करा आणि खालील तक्त्यामध्ये दर्शविल्याप्रमाणे प्रतिक्रिया प्रणाली तयार केली आहे:
| घटक | एन सर्व्हिंग (25µl सिस्टम) |
| nCOV प्राइमर TaqMan प्रोबेमिक्‍चर | 18 µl × N |
| RT-PCR प्रतिक्रिया उपाय | 2 µl × N |
| *N = चाचणी केलेल्या नमुन्यांची संख्या + 1 (नकारात्मक नियंत्रण) + 1 (nCOVसकारात्मक नियंत्रण) | |
2.2 घटक पूर्णपणे मिसळल्यानंतर, ट्यूबच्या भिंतीवरील सर्व द्रव ट्यूबच्या तळाशी पडू देण्यासाठी थोड्या काळासाठी सेंट्रीफ्यूज करा आणि नंतर 20 μl प्रवर्धन प्रणाली PCR ट्यूबमध्ये टाका.
3 नमुना (नमुना तयार करण्याचे क्षेत्र)
निष्कर्षणानंतर 5μl नकारात्मक आणि सकारात्मक नियंत्रणे जोडा.चाचणी करायच्या नमुन्याचा RNA PCR प्रतिक्रिया ट्यूबमध्ये जोडला जातो.
ट्यूबला घट्ट कॅप करा आणि 8,000 rpm वर सेंट्रीफ्यूज प्रवर्धक शोध क्षेत्रात स्थानांतरित करण्यापूर्वी काही सेकंदांसाठी.
4 पीसीआर प्रवर्धन (प्रवर्धित शोध क्षेत्र)
4.1 इन्स्ट्रुमेंटच्या सॅम्पल सेलमध्ये प्रतिक्रिया ट्यूब ठेवा आणि खालीलप्रमाणे पॅरामीटर्स सेट करा:
| स्टेज | सायकल संख्या | तापमान(°C) | वेळ | संकलनजागा |
| उलटप्रतिलेखन | 1 | 42 | १० मि | - |
| प्री-डिनेच्युरेशनn | 1 | 95 | 1 मिनिट | - |
| सायकल | 45 | 95 | १५ से | - |
| 60 | 30 चे दशक | माहिती मिळवणे |
इन्स्ट्रुमेंट डिटेक्शन चॅनल निवड: फ्लूरोसेन्स सिग्नलसाठी FAM、HEX、CY5 चॅनेल निवडा.फ्लोरोसेंट NONE संदर्भासाठी, कृपया ROX निवडू नका.
5 परिणाम विश्लेषण (सेटिंगसाठी कृपया प्रत्येक इन्स्ट्रुमेंटच्या प्रायोगिक सूचना पहा)
प्रतिक्रिया नंतर, परिणाम जतन करा.विश्लेषणानंतर, प्रतिमेनुसार बेसलाइनचे प्रारंभिक मूल्य, शेवटचे मूल्य आणि थ्रेशोल्ड मूल्य समायोजित करा (वापरकर्ता वास्तविक परिस्थितीनुसार समायोजित करू शकतो, प्रारंभिक मूल्य 3 ~ 15 वर सेट केले जाऊ शकते, शेवटचे मूल्य यावर सेट केले जाऊ शकते 5~20, समायोजन) लॉगरिदमिक आलेखामध्ये विंडोच्या उंबरठ्यावर, थ्रेशोल्ड रेषा लॉगरिदमिक टप्प्यात असते आणि ऋण नियंत्रणाची प्रवर्धन वक्र सरळ रेषा किंवा थ्रेशोल्ड रेषेच्या खाली असते).
6 क्वाटी कंट्रोल（चाचणीमध्ये एक प्रक्रियात्मक नियंत्रण समाविष्ट आहे） नकारात्मक नियंत्रण: FAM, HEX, CY5 शोध चॅनेलसाठी कोणतेही स्पष्ट प्रवर्धन वक्र नाही
सीओव्ही पॉझिटिव्ह कंट्रोल: एफएएम आणि एचईएक्स डिटेक्शन चॅनेलचे स्पष्ट प्रवर्धन वक्र, सीटी व्हॅल्यू≤32, परंतु CY5 चॅनेलचे कोणतेही प्रवर्धन वक्र नाही;
वरील आवश्यकता एकाच प्रयोगात एकाच वेळी पूर्ण केल्या पाहिजेत;अन्यथा, प्रयोग अवैध आहे आणि पुनरावृत्ती करणे आवश्यक आहे.
7 परिणामांचे निर्धारण.
7.1 चाचणी नमुन्याच्या FAM आणि HEX चॅनेलमध्ये कोणतेही प्रवर्धन वक्र किंवा Ct मूल्य> 40 नसल्यास आणि CY5 चॅनेलमध्ये प्रवर्धक वक्र असल्यास, 2019 नवीन कोरोनाव्हायरस (2019-nCoV) नाही असे ठरवले जाऊ शकते. नमुना मध्ये आरएनए;
.2 चाचणी नमुन्यात FAM आणि HEX चॅनेलमध्ये स्पष्ट प्रवर्धन वक्र असल्यास आणि Ct मूल्य ≤40 असल्यास, 2019 नवीन कोरोनाव्हायरस (2019-nCoV) साठी नमुना सकारात्मक आहे असे ठरवले जाऊ शकते.
7.3 जर चाचणी नमुन्यात केवळ FAM किंवा HEX च्या एका चॅनेलमध्ये स्पष्ट प्रवर्धन वक्र असेल आणि Ct मूल्य ≤40 असेल आणि इतर चॅनेलमध्ये कोणतेही प्रवर्धन वक्र नसेल, तर परिणाम पुन्हा तपासले जाणे आवश्यक आहे.पुन्हा चाचणीचे निकाल सुसंगत असल्यास, नमुना नवीनसाठी सकारात्मक असल्याचे ठरवले जाऊ शकते
कोरोनाव्हायरस 2019 (2019-nCoV).पुन्हा चाचणीचा निकाल नकारात्मक असल्यास, 2019 नवीन कोरोनाव्हायरस (2019-nCoV) साठी नमुना नकारात्मक आहे असे ठरवले जाऊ शकते.
सकारात्मक निर्णय मूल्य
किटचे संदर्भ सीटी मूल्य निर्धारित करण्यासाठी आरओसी वक्र पद्धत वापरली जाते आणि अंतर्गत नियंत्रण संदर्भ मूल्य 40 आहे.
चाचणी परिणामांचे स्पष्टीकरण
1. प्रत्येक प्रयोगाची नकारात्मक आणि सकारात्मक नियंत्रणांसाठी चाचणी केली पाहिजे.जेव्हा नियंत्रणे गुणवत्ता नियंत्रण आवश्यकता पूर्ण करतात तेव्हाच चाचणी परिणाम निर्धारित केले जाऊ शकतात
2.जेव्हा FAM आणि HEX डिटेक्शन चॅनेल सकारात्मक असतात, CY5 चॅनल (अंतर्गत नियंत्रण चॅनेल) चे परिणाम सिस्टम स्पर्धेमुळे नकारात्मक असू शकतात.
3.जेव्हा अंतर्गत नियंत्रण परिणाम नकारात्मक असेल, जर चाचणी ट्यूबचे FAM आणि HEX शोध चॅनेल देखील नकारात्मक असतील तर, याचा अर्थ सिस्टम अक्षम आहे किंवा ऑपरेशन चुकीचे आहे, चाचणी अवैध आहे.म्हणून, नमुने पुन्हा तपासणे आवश्यक आहे.
